Главная героиня комедии — женщина по имени Лисистрата, чьё имя означает «Разрушительница войны». Она выступает против десятилетней войны между Афинами и Спартой, которая возобновилась после короткого перемирия. Лисистрата организует общегреческую женскую забастовку, целью которой становится прекращение конфликта. Женщины договариваются не вступать в интимные отношения с мужчинами до тех пор, пока те не заключат мир. Для этого Лисистрата собирает на площади перед афинским акрополем представительниц разных городов, несмотря на их бытовые заботы. После обсуждения и споров женщины дают торжественную клятву воздерживаться от близости с мужьями и любовниками.
Женский хор занимает акрополь, где сталкивается с сопротивлением мужского хора пожилых мужчин. Между ними разворачиваются словесные перепалки и песенные споры. На сцену выходит старейший советник, который утверждает, что война — исключительно мужское дело. Лисистрата возражает, подчёркивая, что женщины страдают от последствий войны и потому имеют право вмешиваться в государственные дела. Она сравнивает управление государством с распутыванием пряжи и созданием крепкой нити, необходимой для единства народа. Несмотря на протесты, женщины одерживают верх в споре.
Тем не менее, женщины испытывают трудности с выдержкой забастовки и пытаются покинуть акрополь, но Лисистрата удерживает их, напоминая о цели. Вскоре появляется муж по имени Кинесий, который пытается уговорить жену уступить, но она настаивает на продолжении протеста. Между ними происходит комический диалог с намёками на сексуальное напряжение, а хор стариков сочувствует страданиям мужа.
В итоге стороны вынуждены пойти на примирение. Афинские и спартанские послы начинают переговоры, сопровождаемые символическими жестами взаимопонимания. Лисистрата обращается к ним, напоминая о давних союзах и доблести, призывая к прекращению вражды. Стороны соглашаются обменяться захваченными территориями и заключить мир. В завершение мужской и женский хоры вместе поют о примирении и необходимости сосуществования, отмечая, что жить с женщинами трудно, но без них невозможно. Мир восстановлен, и супруги с песнями и танцами покидают сцену.
